手冊前半部介紹道路生態、路殺課題與對策和高公局保育作為，說明道路對生態環境的各類影響，再針對其中的路殺課題分別介紹減輕改善以及棲地連結的可行作法，說明過去十年來高公局在國道生態保育和路殺減輕改善上的作為，由敏感里程分級管理談起，再簡介道從路殺熱點改善到推動淺山保育和棲地連結的過程，最後則針對國道有進行路殺改善或研究的主要動物類群分別說明改善作法。並將中型哺乳類各類生態友善措施詳細列出並重點說明規劃設計考量和監測內容。最後則介紹國道路殺調查標準作業程序，提供局內相關人員參考。手冊後半部將介紹國道與台灣其他地區的常見與敏感路殺動物6大類群。不同類群頁面顏色不同，方便查找。
